Суттєві зміни відбулися й в релігійно-культурному житті. Через бажання покласти край протиріччям між православним і католицьким духовенством, було скликано Берестейський собор, який не втілив у реальність покладені на нього сподівання, а навпаки, загострив релігійні протиріччя, так як внаслідок Берестейської унії утворилася ще одна церква – греко-католицька. Стосовно ж культурного життя, то активні суспільно-політичні події сприяли значним культурним процесам на українських землях. Відбулося становлення й подальший розвиток української мови, було опубліковано низку високохудожніх літературних пам'яток, а під впливом західноєвропейських тенденцій будувалися світські та культові архітектурні споруди. Нових помітних рис набуває скульптура та живопис.